仪器分析－色谱定性定量

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  1、三、色谱定性与定量方法 人参药材的 HPLC图谱 5 1 1 8 7 5 4 2 3 6 人参皂苷标准品的 HPLC色谱图 Rg1 Rb1 Re 丙二酰基人参皂苷 Rb1 面积归一： Rg1=1.0%, Rb1=3.5% 外标法： Rg1=0.2%, Rb1=0.5% 1. 色谱定性分析 两类方法： （ 1）利用保留值及其规律定性 （ 2）与其它仪器或化学方法联合定性 （ 1）利用保留值及其规律定性 各物质在一定的色谱条件下均有确定不 变的保留值，因此 保留值 可作为 定性指标 。 利用纯物对照定性 利用文献值对照定性（很少用） 纯物质对照定性 实现方法 利用保留时间和保留体积定性 用相对保留

  2、值定性 用已知物增加峰高法定性 , Rs Ri Rs Ri si V V t tr 应用场景范围： 适用于简单混合物 ， 对该 样品已有了解并具有纯物质的情况 。 优点： 应用简便 ， 不需要其他仪器 。 缺点： 定性结果的可信度不高 。 提高可信度的方法：双柱 、 双体系定性 文献值对照定性分析 （ GC） 实现方法 测定相对保留值 ri,s 测定保留指数 I 优点： 无需纯物质；保留指数具有较好的重 现性和精密度；参数只与固定相和柱温有关。 缺点： 对结构较为复杂的物质，缺乏数据。 适合使用的范围： 适用于简单混合物，无需纯物质。 (2) 与其它仪器或化学方法联合定性 离线联用方式 在线、用方式 收集方法： GC中一般都会采用液氮冷阱冷却后 收集 应用场景范围：无标准物时，可对较为复杂的 混合物进行定性分析 缺点：麻烦 在线联用方式 混合物经色谱分离后 ， 将各组分直接由 接口 导入 其它仪器中进行定性 。 常用的联用方法有： GC-MS、 GC-FTIR、 LC-MS ,其它仪器相当于 色谱仪的检 测器 。 应用限制范围： 复杂样品的定性。 优点： 不需要标准物，定性结果可信度高，操作 方便。 缺点： 需要特殊仪器或设备。 GC-MS 2、色谱定量分析 定量基础 色谱定量分析是基于被测物质的量与峰 面积成正比 。 在一定色谱条件下有： ., 是峰面积是绝对质量校正因子其中 iiiii A

  4、fAfm 定量要解决的问题 峰面积的测量和计算 校正因子的测量与计算 色谱定量方法及其应用 峰面积的测量与计算 积分仪 色谱工作站 简便、速度快，精度高，可达 0.2-2%， 对小峰及不对称峰的结果准确，是色谱 发展的新趋势。 重叠峰的测量 切线分峰 垂线分峰 连线分峰 计算机拟合分峰 校正因子的测量与计算 相对校正因子 由于绝对校正因子与仪器的灵敏度 有关 ， 又由于灵敏度与实验条件相关 ， 且每一检测器的灵敏度都是不同的 ， 它不容易测量准确 ， 亦无通用性 ， 所 以实际工作中使用 相对校正因子 。 相对校正因子的表达式 质量校正因子 摩尔校正因子 相对响应值 si is ms mi m m

  5、A mA f f f , , isi sis Ms Mi M MmA MmA f f f , , 1 i i fS 被测组分 的质量 标准物质量 分子量 相对校正因子的测量 理论上相对校正因子与试样、标准物质、检测 器类型、载气类型有关，与其它色谱条件无关。 无纯物质时或对结果准确度要求不高时，相对 校正因子可通过查表得。 即无纯物，手册上又无数据时，可用一些计算 方法估算这些物质的相对校正因子。 定量方法 校正归一化法 含归一化 内标法 含内标标准曲线法 外标法 含单点校正 （ 1）校正归一化法 100 100100% 2211 21 nn ii n ii i fAfAfA fA mmm m

  6、 m m C 推导 ： %100% ii ii i Af AfC 应用场景范围 ： 当试样中各组分都能流出色谱柱 ， 且在检测器上均有响应 ， 各组分峰没有重叠 时 ， 可用此法 。 优点 ： 简便 、 准确 ， 当操作条件如进样量等变 化时 ， 对定量结果影响很小 ， 该法适合于常 量物质的定量 。 缺点 ： 对该法的苛刻要求限制了它的使用 。 归一化法 若各组分的定量校正因子相近或相同 ， 则上 式可简化为： %100% i i i A AC （ 2）内标法 推导 将一定量的纯物质作为内标物 ， 加入到准 确称量的试样中 。 ss ii s i Af Af m m 1 0 01 0 011 0

  7、 0% , sis s i ss siii i fm m A A mAf mAf m mC 适合使用的范围： 当只需测定试样中某几个组分， 且试样中所有组分不能全部出峰时可用。 优点： 受操作条件的影响较小 ， 定量结果较准 确 ， 使用上不象归一化法那样受到限制 ， 此 法适合于微量物质的分析 。 缺点： 每次分析必须准确称量被测物和内标物 ， 不适合于快速分析 。 内标标准曲线法 fi,sms/m为常数 K，此时 Ci%=K(Ai/As)， 以 Ci%对 Ai/As作标准曲线。 优点： 不必测校正因子，消除了某些操作 条件的影响，方法简便，适合液体试样 的常规分析。如白酒分析国标中采用此 法。 外标法（标准曲线法） 用于常规分析 优点： 简单易操作 ， 计算 方便 。 缺点： 结果的准确度取 决于进样量的重现性和 操作条件的稳定性 。 该 法必须定量进样 。 单点校正 当被测试样中各组分的浓度变化范围不大时而用 单点校正法 。 即配制一个与被测组分含量十分接近的标准溶液 ， 定量进样 ， 计算被测物的含量 。 %100% s s i i CA AC 定量中的误差问题 样品的代表性（样品的前处理） 进样系统的影响 柱系统的影响 测量误差 定量结果的误差分析