色谱剖析 第8章 色谱的定性和定量剖析

   氢火焰离子化FID—有机物  电子捕获检测器ECD —含卤素或硝基等强吸电子基团  火焰光度检测器FPD —含S或P  氮磷检测器NPD —含N或P  紫外检测器UVD —含双键共轭结构

   界说 组分含量用体积表明,表明单位峰面 积所代表的组分体积。 Vi Ai fV  Vs As

   运用待测组分纯物质制造一个与待测组分含量 邻近的规范样(设量为ms)，在同一色谱条件下， 别离将相同量的待测组分标样及试样注入色谱 仪，出峰后，丈量其峰面积(或峰高)，得相应 的峰面积As和Ai

   需求标样(规范品)  标样及样品测定的条件要共同  进样体积要精确，重复性好  对样品前处理进程中待测组分的改动无法 补偿。

  含量邻近  称量、配样均需十分精确  一般在接连剖析大批量样品中运用

   一般操作办法 将样品与已知规范物在相同色 谱条件下别离测定  须有规范物  经过比较保存值(一般是保存时刻)的办法， 找到各色谱峰所对应的组份

   特别注意 保存时刻不同，必定不是同一组份 保存时刻相同，或许是同一组份 改动色谱柱或活动相，保存时刻仍彻底

   运用已知规范物定性  定量剖析的根本公式  峰面积的测定办法  运用检测器定性  定量校对因子  联用办法定性  定量办法  化学办法定性  影响要素

   原理 含有特定官能团的化合物可选用化学衍生 法定性  含羟基的化合物可与乙酸酐反响(提早)  卤代烷可与乙醇-硝酸银反响(消失)  伯胺、仲胺可与三氟乙酸酐反响(消失)

   原理 依据化合物在TLC板上的比移值  多用于反响进程的监测  选用适宜的显色办法 (UV、磷钼酸)

   原理 在某些限制条件下，检测器呼应值(色谱 峰的峰面积或峰高)与所测组分的质量或浓度成 正比。

  • mi —组分i的质量 • Ci —组分i的浓度 • fi —组分的校对因子(与检测器的性质和被测组分 的性质有关) • Ai —组分i的峰面积 16 • hi —组分i的峰高

  往不知道样品中参加必定量的已知物质，在同 样色谱条件下比照两色谱图中各峰的峰高。

  间间隔太近，或操作条件不易控制，很难准 确地测定其保存值时，可选用此法进行定性。

  例：某试样含有 5μg 乙醇，测得相应的色谱峰面积 为150mm2，求乙醇的fi。 解：

  例： 精确称取必定质量的色谱纯对二甲苯、甲苯、 苯及仲丁醇，混合后稀释，选用氢焰检测器，定 量进样并丈量各物质所对应的峰面积，数据如下： 物质 m/μg A/cm2 苯 0.4720 2.Байду номын сангаас0 仲丁醇 甲苯 对二甲苯 0.4547 2.20

  42具体步骤在确认的色谱条件下测定样品中待测组分i的峰面积或峰高a核算43是同一组分在参加纯物质前后两次测定的肯定校对因子所以有44规范参加法的特色不需别的的规范物质做内标仅需有待测组分的纯物质进样量的精确性影响不大简略易操作若在样品前处理之前就参加已知精确量的待测组分则可彻底补偿待测组分在前处理进程中的丢失要求参加待测组分前后两次色谱测定的色谱条件彻底相同才或许正真的确保两次测守时的校对因子彻底持平45样品制备前处理办法转化率溶剂供试液贮存进样技能与外标法关系密切手动进样阀进样色谱条件活动相流速活动相组成温度柱效色谱峰的对称性检测器功能线性关系浓度型检测器质量型监测器活络度别离度大则影响小2546特异性specificity剖析物定性的调查是对所剖析的特定样品产生特定信号无搅扰物nointerference将样品中所有成分独自进样在待剖析组分邻近不该有其它峰搅扰

   相对呼应值是物质i与规范物质S的呼应值(活络 度)之比。  单位相一起，与校对因子互为倒数，即：

   只与试样、规范物质以及检测器类型有关，而 与操作条件和柱温、载气流速、固定液性质等 无关，是一个能通用的常数。

   校对因子的试验丈量办法  样品的预备 测定校对因子时，要精细称定 适量色谱纯的被测组分和基准物质，制造成 已知精确浓度的样品。  样品的测定 在已确认的色谱条件下，取准 确体积的样品进样，从谱图上取得精确的峰 面积。  核算 依据相对校对因子的核算公式能算 出质量(或摩尔或体积)校对因子。

  • f—相对校对因子，简称为校对因子 • mi, ms—被测物质、基准物质(s)的质量 (或浓度) • Ai(hi), As(hs)—被测物质、基准物质(s) 的峰面积(或峰高)

  依据物质量的不同表明办法，校对因子分为： a) 质量校对因子(fm)  界说 当组分含量用质量来表明时的校对因子称

  精确，当操作条件如进样量、流速等产生显着的改动时， 对核算结果的影响很小，是一种常用的核算办法。

  • HPLC中较少运用(常用检测器为非通用型检测器、 不能疏忽校对因子)

   不同物质因为物理和化学性质的差异，在 同一色谱条件下的呼应程度不同。  例如 含量持平均为50%的两个组分，色谱 峰面积一般不持平。  因而需建立一个润饰峰面积的参数以校对 上述误差——校对因子

  I. 肯定校对因子fi  fi的物理含义 单位峰面积所代表的i组分的 量，是一个与i组分的物理化学性质和检测 器的性质有关的常数。

   原理 相同色谱条件下(柱长、柱温、固定相、 活动相)，组分有固定的色谱保存值(一般为保 留时刻) 。

  ② 外标法  外标法又可分为规范曲线法和外标一点法， 是色谱定量剖析中很常用的一种办法。  归于肯定定量办法。

   规范曲线法 用浓度—峰面积(峰高)制作标 准曲线，其斜率的倒数即为肯定校对因子， 规范曲线应该是一条经过原点的直线

  为质量校对因子 (fm),表明单位峰面积所代表的组 分质量，质量一般用 g 或 mg 表明。

  • mi, ms —被测物质、基准物质的质量 • Ai(hi), As(hs)—被测物质、基准物质的峰面积

  b) 摩尔校对因子(fM)  界说 组分含量用摩尔数表明，表明单位峰 面积所代表的组分摩尔数

   双检测器系统 将两种检测器并联或串联  串联须将非破坏性检测器(TCD、UVD)臵于 前端  假如两种检测器均为破坏性的，则须并联。  常用FID-ECD、FPD-TCD、FPD-FID等 11

   原理 将色谱(HPLC、GC)的高别离效能和波谱 法(MS、IR、NMR)的高辨别效能结合。