色谱剖析技能概述和运用实例ppt

  取本品水蜜丸6g，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸9g，切碎，加硅藻土4g，研匀。加40ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥去，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)实验，汲取上述两种溶液各10μl,别离点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷－醋酸乙酯(3:1) 为打开剂，打开，取出，晒干，喷以盐酸酸性 5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑驳显色明晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的方位上，显相同的蓝褐色斑驳。 （2005年版《春心药典》一部 401页） 一、六味地黄丸中丹皮酚的薄层辨别 第四节 运用实例 1.丹皮酚； 2～5.六味地黄丸 六味地黄丸中牡丹皮的薄层图谱 二、醋酸可的松中其他甾体的查看 取本品，加氯仿-甲醇(9︰1)?制成每1ml?中含10mg的溶液，作为供试品溶液；精细量取适量，加氯仿-甲醇(9︰1)?稀释成每1ml?中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录Ⅴ?B）实验，汲取上述两种溶液各5μl，别离点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以二氯甲烷--甲醇-水(385︰60︰15︰2)?为打开剂，打开后，晒干，在105?℃枯燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，当即检视。供试品溶液如显杂质斑驳，不得多于3?个，其色彩与对照溶液的主斑驳比较，不得更深。 三、硫酸长春碱中杂质的定量查看 《春心药典》(2005年版)规则硫酸长春碱中其他生物碱的查看办法如下：取本品，加甲醇制成10mg/ml溶液作为供试溶液。精细汲取适量加甲醇制成0.02mg/ml溶液作为对照液。取上述两溶液各5μl点于同一硅胶GF254薄板上，打开，检识；供试溶液中的杂质斑驳不允许超出两个，且色彩不得深于对照溶液主斑驳的色彩。 四、盐酸氯丙嗪中有关物质的极限查看 有关物质（吩噻嗪类其他替代物） 避光操作。取本品，加甲酸制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液；精细量取适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法实验，汲取上述两种溶液各10μl，别离点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-丙酮-二乙胺（80:10:10）为打开剂，打开，晒干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液 如显杂质斑驳，与对照溶液所显的主斑驳比较，不得更深。 五、九涣散中士的宁的含量测定 略 六、枳实导滞丸中陈皮苷的含量测定 略 七、黄连上清丸中盐酸小檗碱的含量测定 略 （1）硅胶：极性吸附剂，运用场景规模广 物理吸附为主，氢键吸附为辅 微酸性，不直接用于碱性成分的别离 机械强度好，适用于薄层色谱 吸附容量大，与羟基数目有关 常用硅胶的规范：硅胶H，硅胶G，硅胶GF254等 （2）氧化铝：a.极性吸附剂，较硅胶强。 b.物理吸附为主，氢键吸附为辅 c.微碱性，不直接用于酸类成分的别离 碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物 碱以及其它碱性化合物的别离。 中性氧化铝：运用最广，适用于醛、酮、 醌以及酯类化合物的别离。 酸性氧化铝：适用于有机酸类的别离。 硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。 只要在110℃左右加热，这些“自在水” 就能被可逆性地除掉。运用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱活化（加水）处理，以操控吸附剂的活性。  硅胶、氧化铝的含水量与活性等级 活性等级 I II III IV V 氧化铝加水量 /% 0 3 6 10 15 硅胶加水量 /% 0 5 15 25 38 硅胶、氧化铝薄层：被别离物质极性越大，越易被吸附。 一般规则： （1）官能团极性越大，整个分子极性越大，越易被吸附； （2）构成分子内H键时，被吸附力削弱； （3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。 常见官能团极性次序： 烷烃烯烃醚类硝基化合物酯类酮类 醛类硫醇胺类醇类酚类羧酸类 被别离物质极性与吸附才能的火燎 （二）打开剂（活动相）的挑选 硅胶、氧化铝薄层：打开剂的极性越大，其打开才能越强，化合物在色谱中移动的速度就越快，表现为Rf 增大。 常用溶剂极性巨细 石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯 ＜＜三氯甲烷（氯仿）＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水 挑选准则：被别离成分极性大打开剂极性大被别离成分极性小打开剂极性小 吸附剂、打开剂挑选规则 考虑三方面要素：被别离组分极性，吸附剂活性、洗脱剂极性。 生动 不生动 吸附剂 （固定相） 打开剂 （活动相） 被别离物质 B B’ A C C’ 极性 非极性 非极性 极性 A’ Ⅴ Ⅰ 硅胶薄层色谱规则总结 被别离组分 极性 打开剂 极性 吸附剂 活性 Rf 被别离物洗脱次序 大 大 弱 小 后洗脱 小 小 强 大 先洗脱 第二节 薄层色谱体系简介 第三节 操作办法及需求留意的几点 略：在操作办法中部分介绍 一、仪器的功能检定 二、布景搅扰的消除 三、样品测定操作办法 1、薄层板的制备 2、点样 3、打开 4、显色和定位 5、薄层扫描仪对斑驳扫描 1、薄层板的制备 要求：玻璃板需光亮，不然吸附剂易掉落； 巨细由需求决议。 薄层板分类和制法 软板的制备 硬板的制备 倾泻法 平铺法 机械涂布法 1、薄层板的制备 （1）软板的制备 软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂 3.橡皮膏 4.橡皮管 要求：厚度→随别离要求而定，一般0.25～0.5mm 玻璃棒推进速度不宜过快、也不该中止→影响厚度均一性 长处：办法简洁、随用随铺、打开速度快。 缺陷：吸附剂易掉落、只能用近水平打开，效果差。 薄层板分类和制法 软板的制备 硬板的制备 倾泻法 平铺法 机械涂布法 1、薄层板的制备 （2）硬板的制备 硬板：吸附剂加粘合剂制成的板 常用的粘合剂：煅石膏（Ｇ） 机械强度差，易掉落，但不易腐蚀 羧甲基纤维素钠（CMC-Na） 机械强度好，不易掉落，但易腐蚀且 a、倾泻法： 硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状 硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状 倒在玻璃板上 均匀铺开、振动、晒干、活化、置枯燥器中备用。 （2）硬板的制备 b、平铺法： 1. 吸附剂薄层 2. 涂布器 3. 玻璃夹板 4. 玻璃板 5. 玻璃夹板 进程：制板→振动→晒干→活化→备用 长处：一次铺多块薄层板，简略易行。 （2）硬板的制备 c、机械涂布法： 长处：简略便利、薄板厚度均匀、别离效果好。 手动涂布器 全自动涂布器 常用的薄层板： 软板：硅胶H板、氧化铝H板 硬板：常用的有硅胶G板、氧化铝G板、硅胶CMC-Na板、氧化铝CMC-Na板、硅胶GF[254] 、硅胶GF[356] 2、点样 （1）样品溶液的制备： 怎样挑选溶剂？ 水可以用吗？ 2、点样 （2）点样量： 与薄层板的火燎 太多太少的影响 点样基线、点样 （3）点样办法： 划线、样品记号点、点样 注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑驳巨细恰当，可屡次点样。 平头50ul微量点样器 全自动点样仪 3、打开 打开缸（色谱缸） 3、打开 （1）打开办法： a、近水平打开 特色：速度快、适用于软板的打开。 3、打开 （1）打开办法： b、上行打开 进程：预饱满（滤纸贴于打开槽内侧）、打开、符号溶剂前沿 c、单向二次打开 d、双向二次打开 3、打开 （1）打开办法： 萜的各类含 氧衍生物 极性较小的打开剂 极性较大的打开剂 原点：含氧衍生物 萜烯类 含氧衍生物 3、打开 （2）留意事项： a、色谱槽需密闭杰出 脂溶性打开剂：甘油淀粉糊 水溶性打开剂：凡士林 b、留意避免边缘效应 4、显色和定位 一般规则：日光下调查、紫外灯下调查、加显色剂 加显色剂：多喷雾，软板运用浸渍显色法 紫外灯调查 喷显色剂调查 5、薄层扫描仪对色谱斑驳进行扫描 用一束长宽能调理的必定波长、必定强度的光照射到薄层斑驳上进行整个斑驳的扫描，用仪器丈量经过斑驳或被斑驳反射的光束强度的改变从而到达定量的意图。? 判别根据：Rf值、Rs值 1、查找材料：影响Rf值的要素 吸附剂品种、活度、颗粒巨细；打开剂纯度和极性；薄层厚度；点样量；打开办法、温湿度；打开槽中的预饱满状况等。 2、对照品比较法：常用。 四、成果核算和判别 （一）定性辨别 1、对照品比较法： 杂质对照品制成必定浓度的溶液 样品制成必定浓度溶液 按相同的点样量点样 打开后调查斑驳色彩深浅和巨细 （二）杂质查看（杂质定量查看） 如异烟肼中游离肼的查看： 肼是一种诱变剂和致癌物质，春心药典对异烟肼质料和注射用异烟肼中游离肼的查看均选用薄层色谱法。 查看办法取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶液，作为对照溶液。汲取供试液10μl 与对照溶液2μl，别离点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙酮（3:2）为打开剂，打开后，晒干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品主斑驳前方与硫酸肼斑驳相应的方位上，不得显黄色斑驳。 2、本身稀释比照法（杂质结构不明或无杂质对照品） 样品溶液稀释制成必定浓度的溶液 样品制成必定浓度溶液 按相同的点样量点样 打开后调查斑驳色彩深浅和巨细 （二）杂质查看（杂质定量查看） 如中有关物质的查看： 取本品的细粉适量（约相当于200mg），加丙酮5ml,振摇，使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精细量取适量，加丙酮稀释成每1ml中含0.20mg的溶液，作为对照溶液。点样打开后，供试品溶液如显杂质斑驳，与对照溶液的主斑驳比较，不得更深。 1、目视比较法： 对照品制造而成不同浓度的系列溶液 样品制成定量溶液 按相同的点样量点样 打开后调查斑驳色彩深浅和巨细 注：本法适用于近似含量的测定，差错±10% （三）含量测定 2、斑驳洗脱法 对照品制成溶液 点于薄板香喷喷 样品制成必定浓度溶液 线状点于薄板开始线中心部分 打开 对对照品显色，以此为依 据刮下含有样品的吸附剂 将样品溶解，依照分光光度法测定溶液浓度 （三）含量测定 3、薄层扫描法 （三）含量测定 （1）外标法 用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的呼应信号相比较进行定量的办法称为外标法。此法可分为作业曲线法及外标一点法等。作业曲线法是用对照物质受人支配一系列浓度的对照品溶液确认作业曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下，精确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从规范曲线上查出其浓度，作业曲线法也可以用外标二点法替代。一般截距应为零，若不等于零阐明存在体系差错。作业曲线的截距为零时，可用外标一点法定量。 此法要求点样量精确相同。? 色谱剖析技能概述和运用实例 一、色谱法的来源、开展及界说 概 述 一、色谱法的来源、开展及界说 柱色谱→薄层色谱和纸色谱→气相色谱→毛细管柱 色谱→高效液相色谱→薄层扫描仪→毛细管电泳→色谱-光谱联用、多维色谱、智能色谱。 液相色谱（经典） 气 质 联 用 又称层析法，是一种根据物质的性质（溶解性、极性、离子交换才能、分子巨细等）的不同，当活动相带着样品流经固定相时，样品各组分在两相中不断的重新分配，终究到达别离与提纯，以便于对样品进行定性和定量剖析的剖析办法。 一、色谱法的来源、开展及界说 二、色谱法的分类 按两相状况不同分类 按操作办法不同分类 按色谱别离进程的原理不同分类 按两相状况不同分类 色谱其间的一相固定不动，称为固定相; 另一相是带着试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为活动相。 两 相状 态 活动相 的物态 液相色谱（LC） 气相色谱（GC） 二、色谱法的分类 按两相状况不同分类 按操作办法不同分类 按色谱别离进程的原理不同分类 按操作办法不同分类 柱色谱 纸色谱 薄层色谱 二、色谱法的分类 按两相状况不同分类 按操作办法不同分类 按色谱别离进程的原理不同分类 按色谱别离进程的原理不同分类 （1）吸附色谱 （2）分配色谱 （3）离子交换色谱 （4）分子排阻色谱（凝胶色谱法) 色谱法 GC LC CE 填充柱色谱法 毛细管柱色谱法 柱色谱 平面色谱法 高效液相色谱法 经典液相色谱法 吸附柱色谱 分配柱色谱 离子交换色谱 凝胶色谱 薄层色谱法 纸色谱 毛细管电泳色谱法 三、色谱进程 四、色谱曲线相关术语 W：峰宽 Wh/2：半峰宽 tR：保存时刻 t0：死时刻 tR，：调整保存时刻 色谱峰 基线 第七章 薄层色谱法 ? 薄层色谱是在平面上进行别离的一种办法，又名平 面色谱法。一般将固定相(吸附剂)均匀地涂铺在外表洁 净的玻璃、塑料或金属板构成薄层，制成薄板，进行样品别离。 特色：快速 活络（用量小） 高挑选性（好像分异构体） 简洁 显色便利 运用广泛：化合物的辨别和少数化合物的别离 用于检测药品含量 药物组成中用于辨别反响程度和监控反响进程 用于探索高效液相的色谱条件 (一)吸附色谱别离原理 运用吸附剂对不同成分吸附力的巨细及打开剂解吸附效果的差异进行别离。 吸附牢的组分随打开剂移动慢，吸附弱的组分随打开剂移动快，一段时后，组分被别离。 固定相:固体吸附剂 活动相:液体打开剂 一、根底原理 第一节 薄层色谱法的根底原理 溶剂前沿 开始线 A B a b c （1）比移值Rf： Rf是薄层色谱法根本定性参数，必定条件时Rf为定值，在0～1之间，可用规模Rf值在0.2～0.8之间。组分极性越大，Rf越小,反之越大。 （二）比移值与相比照移值 （2）相比照移值Rs：为消除体系差错 Rf1,Rs不必定小于1。 （二）比移值与相比照移值 二、吸附薄层色谱中吸附剂与打开剂 常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸附树脂等。吸附剂的挑选要适宜，与活动相、被别离化合物不反响 （一）吸附剂（固定相）的挑选

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