液相色谱仪3D仿真实训报告

  (1)按泵的[pump]键，亮pump指示灯。用检测验证的方法规定的流动相冲洗系统，一

  般最少需6倍柱体积的流动相，观测泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。

  (3)进样：将样品用滤膜过滤，用10uL玻璃注射器将样品液体从进样阀进（注意，进样时，最好还是不要让针头接触进样孔的壁），进好样后，来测试，观察工作电脑桌面上液相曲线变化，测试完后停止进样，用电脑进行数据分析。

  (5)开机：接通电源，依次开启不间断电源、泵、检测器，和检测器自检后，打

  (6)用样品液润洗注射器，润洗干净后，取20µL标准液，注入贮液器，观察电

  (7)用润洗液润洗注射器，润洗干净后，取20µL样品也，注入贮液器，观察电

  (4)气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用的过程中要尽可能的避免产生气泡。

  (5)如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。

  (6)更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。

  影响柱效能的重要的因素有：填料、柱压、温度、流速。于是在实验过程中要注意仪器在运行中不能进入气体，否则会导致压力不稳定，影响柱效。

  (1)流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质。

  (2)使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml左右。

  色谱柱标明了流体的流动方向，不要改变其流动方向，否则会降低色谱柱的性能。

  (3)流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[enter]键确认。按[CE]键退出，也可在软件中设定。

  将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中，逆时针转动A/B泵的排液阀180o，打开排液阀，按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9mL/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止，将排液阀顺时针转到底，关闭排液阀，如管路中有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

  高效液相色谱分析的流程。由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。高效液相色谱的分离过程。同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

  不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

  由于实验组分最简单，只要在实验过程中，严控且定量进样，就能得出准确的实验结果。若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于实验操作及计算均较为复杂，实验及数据处理的时间长，效率相对不高，故实验中采用外标法作为定量的方法。

  最佳色谱条件的选择是本实验准确度的关键。进样针进样时确保进样针中没有残留气泡，另外，在进不同浓度或不同的物质前因先用甲醇溶液润洗干净，以免相互影响。

  （1）波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入波长值，按[enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕，也可以再一次进行选择LC-solution软件方便地设定；

  (2)流速设定：在泵显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入所需的流速（柱在线mL/min），按[enter]键确认。按[CE]键退出，也可以再一次进行选择LC-solution软件设定；