色谱仪的使用和维护

  第一次启动泵用甲醇冲洗系统，停用，甲醇充满，以防长菌 更换新的流动相，用与两种流动相都互溶的溶剂做过渡，同 时注意流动相别毁坏色谱柱 使用过滤的、脱气的流动相，不使用放置过久的蒸馏水，可 加入10-4-10-3M的叠氮化纳 梯度洗脱时，最好使用粘度相同或相近的溶剂组成流动相 储液瓶中流动相的液位至少要高出流动相入口处10cm，防 止气泡进入溶剂中

  测试完后，使用阀附带的冲洗附件对进样阀入口进行冲洗， 切换Load 和 Inject 档位反复冲洗 如果是梯度洗脱方式，让进样阀保持在Inject位置，到下次 进样前1~2分钟切换回Load位置，将进样器从进样阀中拔出 进样时确保进样针中无气泡，进样时样品的浓度应从低到 高，如果进样顺序是样品的浓度从高到低，在下次进样前应 用流动相彻底清洗进样阀和进样器 要使用专用的液相平头注射器进样；绝对不可以用气相的 注射器，会严重刮坏转子垫圈 扳动手动进样阀时速度要快，否则会造成局部压力过高， 损坏阀

  打开Purge阀，设定泵的流速2ml/min，提起当前所使用 溶剂瓶内的溶剂过滤头，使之脱离液面一小段时间，此时溶 剂传送管内会产生一小段气泡，放下过滤头，让此段气泡通 过脱气机，如果脱气机正常，气泡应消失或缩小。

  通常结合两个方面： 1、从进样器观察，进样后将针拔出，若从进样口或排空管 有液体冒出，显示密封圈磨损。 2、从结果看：通常有压力不稳定，峰面积或保留时间不稳 定和残留严重。

  关闭泵，拧开脱气机出口或比例阀入口管线，此时溶剂 会因为重力流出，脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出 不畅或不流出。

  判断比例阀是否内漏 设定泵使用一个单独通路(A)，打开Purge阀，流速 5ml/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面 ，观察这些通路(B、C、D) 内的溶剂是否随着流动，正常 时均不应流动。 判断何时应该更换Purge阀内的过滤白头 使用纯水作流动相，打开Purge阀，流速5ml/min，观察系 统压力，如果超过10bar，应该更换。

  色谱柱对流动相的要求 与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂的黏度 防止细菌的生长

  色谱泵输液准确 输液均匀准确，脉动减少，保留时间和峰面积重现性提高 提高检测性能 防治气泡引起尖蜂，基线稳定，信燥比增加，溶剂紫外本底降低 保护色谱柱 减少死体积，防止填料氧化 方式 加热：简单，效果好，但易引起流动相组成变化 抽真空：简单，效果较好。推荐设备：溶剂脱气机 超声波：简单，但效果不理想。推荐设备：超声波清洗仪 通惰性气（氦气）：可保持连续脱气，多用于低压梯度，费用较高 在线脱气机：可保持连续脱气，多用于低压梯度，只需一次性投资

  除去微粒和杂质 了解样品在流动相中的溶解度。如果样品的溶剂不是流动 相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出 了解样品与色谱柱的基质、填料是否相互作用 避免超负荷进样,对250 ×4. 6 mm 的柱子,绝对进样量应不 超过100μg。在灵敏度允许的前提下,应尽量将试样浓度降低, 减少绝对进样量(进样体积可保持不变) ,这是保持HPLC 柱性 能持久良好的重要举措之一。

  如果流动相的水相中含有无机盐时，建议使用“柱塞杆的在线 冲洗装置”。在关闭系统之前应用CH3OH—H2O(20:80)继续冲洗 系统30min，以便除去色谱柱中的无机盐。最后再用甲醇或乙腈 冲洗系统10min。 使用的过程中，要注意仔细观察在线过滤器、单向阀、手动进样阀、 色谱柱等一些重要部件的功能是不是正常，假如慢慢的出现故障，应及 时排除。主要是观察各接口处是否有漏液、检测器的出口是否 有持续的液滴滴出，压力是否稳定。

  污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿 命，并且影响泵的运行。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH 4 至7) 中尤其如此。下列建议将会延长溶剂过滤器的常规使用的寿命并维持泵 的运行。 使用灭过菌的溶剂瓶来减缓藻类生长。 使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或盐缓冲液建议不超过 两天。 如果应用许可，在溶剂中加人0.0001－0.001 M的叠氮化钠。 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。 用氩气置换流动相上层的空气。 定期清洗溶剂过滤器及溶剂瓶，每三个月至少清洗一次。 注意：不可以使用没安装溶剂过滤器的系统．可能会严重堵塞 系统

  在在线过滤器中人为地引入气泡，将流量设定为 1.0ml/min，然后观察气泡在聚四氟乙烯管中的运动 状态：如果气泡是平稳的上升，说明两个单相阀的功 能都是正常的，如果气泡是上去了而后又下来了，说 明吸入阀出现了故障，如果气泡静止不动或缓慢上升 ，说明排出阀出现了故障。