高效液相色谱仪操作使用的过程中的需要注意的几点

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  高效液相色谱仪操作使用的过程中的需要注意的几点一高效液相色谱仪操作的流程1开机操作1打开电源用Harb相连接时注意Harb电源打开计算机打开BootpServer一般启动时已打开2自上而下打开个组件电源BootpServer里显示有信号时有六行字符打开工作站先打开Online3打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关需用针捅抽控制流量大小以能流出的最小流量为准4注意各流动相所剩溶液的容积设定若设定的容积低于最低限会自动停泵注意洗泵溶液的体积及时加液5使用的过程中要经常观察仪器工作状态及时正确地处理各种突发事件2先以所用流动相冲洗系统一段时间如所用流动相为含盐流动相必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯以延长灯的常规使用的寿命3建立色谱操作方法注意保存为自己命名的Method勿覆盖或删除他人的方法及实验结果4使用手动进样器进样时在进样前

  和进样后都需用洗针液洗净进样针筒洗针液一般选择与样品液一致的溶剂进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上并排除针筒中的气泡5溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎在更换流动相时注意保护当发现过滤头变脏或长菌时不可用超声洗涤可用5稀硝酸溶液浸泡后再洗涤6实验结束后一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上再用甲醇冲洗冲洗过程中关闭D灯W灯7关机时先关闭泵检测器等再关闭工作站然后关机最后自下而上关闭色谱仪各组件关闭洗泵溶液的开关8使用者须认真履行仪器使用登记制度出现问题及时向老师报告不要擅自拆卸仪器续1操作的流程若发现压力很小则可能管件连接有漏注意检查当出现错误警告各组件指示灯均为红色一般为漏液其中一个感应器中已有溶剂漏液故障排除后擦干点击Online操作界面中的InstrumentSystemOff然后再点击操作界面中的InstrumentSystemOn即可2连接柱子与管线时应注意拧紧

  螺丝的力度过度用力可导致连接螺丝断裂柱接头处易发生漏液可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异建议还是不要混用必要时可使用PEEK管及活动接头3操作的流程若发现压力非常高则可能管路已堵应先卸下色谱柱然后用分段排除法检查确定何处堵塞后解决若是保护柱或色谱柱堵塞可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗还可采用小流量反冲的办法新柱不提倡若还是无法通畅则需换柱4运行过程中自动停泵可能为压力超过上限或流动相用完5样品瓶中样品较少自动进样器进样针无法到达液面可采用调低进样针进样高度的办法注意设置时不要使进样针碰到瓶底微量样品分析应使用微量样品瓶6自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对准时需重新定位7泵压不稳或流量不准可能为柱塞杆密封圈问题或sealwash垫圈问题需更换8基线产生不规则噪声可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡使其平衡若用离子对试剂在首次使用

  使需要足够的时间和溶剂体积色谱柱才可以做到足够的平衡流动相被污染更换流动相清洗储液器过滤器冲洗并重新平衡系统色谱柱被污染为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱检测器不稳定9短期有规则的噪声可能原因为泵压不稳或泵脉冲调节溶剂不适当如两种溶剂的互溶性问题泵入口管路松或堵塞泵太脏泵柱塞磨损检测器不稳定10长期有规则噪声可能原因为室温不稳未使用柱温箱或使用柱温箱不当11基线漂移可能原因为系统不稳或未达到化学平衡室温不稳未使用柱温箱流动相污染或分解柱污染检测池泄漏系统泄漏固定相流失另选流动相另选色谱柱测定的波长选择错误对溶剂有吸收样品组分保留太长用强度合适的溶剂清洗色谱柱检测器不稳定12每次进样时的保留时间不重复可能原因为系统不稳或未达到化学平衡由于气泡各部件磨损等原因引发的泵压或泵脉冲输液不稳定进样体积太大或样品浓度太高平衡被破坏溶剂配比不合适柱被污染13无峰可能

  原因为检测器选择错误使用错误的流动相样品降解14色谱峰比预计的小可能原因为进样体积错误检测器灯故障进样问题瓶号错进样体积不合适进样错误针头堵塞15峰变宽可能原因为进样体积太大或样品浓度太高过滤器保护柱入口柱入口或连接管路有部分堵塞检测器时间常数设置错误进样器问题如阀漏针头堵塞或损坏柱或保护柱被污染对流动相来说样品溶剂太强使用错误的色谱柱气温变化16出现双峰肩峰可能原因为保护柱或柱入口部分阻塞柱或保护柱被污染柱性能直线下降保护柱失效进样体积太大或样品浓度太高样品过载平衡破坏17前沿峰可能原因为进样体积太大或样品浓度太高样品过载平衡破坏对于流动相来说样品溶剂非极性太强对于反相柱柱或保护柱被污染柱性能直线下降保护柱失效18脱尾峰可能原因为柱或保护柱被污染柱性能直线下降保护柱失效进样器问题如阀漏等检测器时间常数设置错误19出现鬼峰可能原因为流动相被污染样品预处理时产生降解或混入杂质先前进样的流出

  物样品定量管清洗不当注射器脏柱被污染进样装置被污染流动相中含有稳定剂稳定剂变化二高效液相色谱柱使用需要注意的几点1使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书注意适合使用的范围如pH值范围流动相类型等2使用符合标准要求的流动相3使用保护柱4如所用流动相为含盐流动相反相色谱柱使用后先用水或低浓度甲醇水如5％甲醇水溶液再用甲醇冲洗5色谱柱在不使用时应用甲醇冲洗取下后紧密封闭两端保存6不要高压冲洗柱子7不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱三流动相操作1流动相应选用色谱纯试剂高纯水或双蒸水酸碱液及缓冲液需经过滤后使用过滤时注意区分水系膜和油系膜的应用限制范围2水相流动相需经常更换一般不超过2天防止长菌变质3使用双泵时ABCD四相中若所用流动相中有含盐流动相则AD进液口位于混合器下方放置含盐流动相BC进液口位于混合器上方放置不含盐流动相ABCD四个储液器中其中一个为棕色瓶用于存放水相流动相

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